# Medios de cría de termitas Reticulitermes fabricados con madera de olmo y pino podrida. Y. Mitaka · E. L. Vargo Artículo traducido con https://www.deepl.com/es/translator ## Resumen Las termitas no sólo son descomponedores en ecosistemas forestales y de sabana, sino también importantes plagas de edificios de madera en todo el mundo. Por ello, las termitas interesan desde hace tiempo a los investigadores y se necesitan medios para mantenerlas en el laboratorio. Recientemente, se ha desarrollado un medio de "celulosa mixta de madera de pino podrida" (BPC) utilizando pino rojo japonés (Pinus denriflora) como medio para la cría estable a largo plazo de la termita subterránea *Reticulitermes speratus*. No está claro si el método de preparación del medio BPC puede aplicarse a otras especies de termitas que utilizan diferentes tipos de madera. Aquí, desarrollamos dos medios para criar dos especies de termitas americanas (*Reticulitermes flavipes* y *R. virginicus*): El medio "brown-rotted elm wood mixed cellulose" (BEC) utilizando olmo alado (Ulmur alata) y el medio BPC utilizando pino taeda (P. taeda). En la fundación de colonias por *R. flavipes* de alados, cerca del 80% de las colonias incipientes en medios BEC y BPC produjeron con éxito larvas y obreras, mientras que menos del 21% de las colonias en medios de celulosa lo hicieron. La cría a largo plazo de obreras de *R.* *flavipes* mostró que la tasa de consumo de alimento era mayor en los medios BEC y BPC que en el medio de celulosa. Por otra parte, la cría a largo plazo de obreras de *R. virginicus* mostró que el coeficiente de digestibilidad aparente era mayor en el medio BPC que en los demás medios. Estos resultados indican que los medios BEC y BPC pueden utilizarse tanto para la fundación de colonias por alados como para la cría de obreras en *R. flavipes*, y que el medio BPC es más adecuado para la cría de obreras de *R. virginicus*. Estos nuevos medios y otros fabricados mediante el mismo proceso contribuirán al mantenimiento de colonias de termitas en el laboratorio para una gran variedad de experimentos. Palabras clave: Termitas - Cimentación de colonias - Madera de olmo - Madera de pino - Celulosa ## Introducción Las termitas son importantes descomponedores en los ecosistemas forestales, de sabana y desérticos (Lo y Eggleton 2011[^1]), y algunas especies, especialmente las termitas subterráneas como las especies *Reticulitermes*, son plagas estructurales debido a su alta capacidad de consumo de madera (**Rust y Su 2012**[^2]). Por lo tanto, las termitas han sido durante mucho tiempo de interés para los investigadores en términos de genética, ecología, fisiología, etología y gestión de plagas (**Rust y Su 2012; Arab et al. 2021**[^3]:), y ha habido una necesidad de medios para la cría de colonias de termitas en el laboratorio durante largos períodos de tiempo. Sin embargo, los métodos de cría de termitas varían mucho de un investigador a otro, y muchos utilizan madera natural y tierra como alimento y material de nidificación (**Becker 1969**[^4]). Dado que el uso de madera y suelo naturales puede conllevar el riesgo de contaminación por patógenos (**Rosengaus et al. 2011[^5]; Aguero et al. 2021**[^6]), es necesario desarrollar un medio para cada especie de termita que esté estandarizado en su proceso de fabricación, que tenga un bajo riesgo de contaminación por patógenos y que contenga suficientes nutrientes para el crecimiento de las termitas y que sirva como alimento y material de nidificación. Recientemente, se ha desarrollado un medio compuesto por polvo de madera de pino podrida y polvo de celulosa, denominado "medio de celulosa mixta de madera de pino podrida" (BPC), como medio estándar para la cría de la termita subterránea japonesa Reticulitermes speratus (**Mitaka et al. 2023**[^7]). Este medio es una versión modificada del cebo de serrín mixto (**Matsuura y Nishida 2001**[^8]), que está hecho de troncos o árboles podridos de madera de pino (Pinur den- riflora) que ha sido triturada, esterilizada en autoclave y luego fermentada con levadura durante aproximadamente un mes. El medio BPC presenta un alto índice de éxito en la fase inicial de establecimiento de colonias por parejas de de alados (el 90% de las parejas de de alados anidaron en el medio BPC). podrida. medio en una semana) y una alta tasa de supervivencia de las poblaciones de obreras (más del 80% de las obreras sobrevivieron tras el primer mes de cría) en comparación con los otros medios (**Mitaka et al. 2023**[^9]). Cuando los alados establecen colonias utilizando madera natural podrida o tierra, sólo el 50% o menos de las parejas de de alados sobreviven tras la primera semana de cría (**Eyer y Vargo 2022**[^10]). Así pues, parece que una mezcla de polvo de madera podrida fermentada y polvo de celulosa, como el medio BPC, es un alimento y material de nidificación más adecuado que la madera podrida natural sin tratar y la tierra. En este estudio, nos propusimos determinar si un medio fabricado siguiendo el mismo proceso que el medio BPC, pero a partir de madera en descomposición de especies distintas de _P. denriflora_, podría adaptarse para la cría de otras especies de termitas. Desarrollamos dos tipos de medios para la cría de dos especies de termitas americanas (_Reticulitermes flavipes_ y _Reticulitermes virginicus_): El medio "celulosa mixta de madera de olmo podrida" (BEC), que utiliza madera de olmo alado (_Ulmus alata_), y el medio BPC, que utiliza madera de pino _taeda_ (_Pinus taeda_). También se probaron los efectos de estos dos medios sobre la supervivencia y el crecimiento de los individuos de _R. flavipes y R. virginicus. ## Materiales y métodos ### Preparación del medio para la cría de termitas Recogimos troncos de madera de olmo _alado_ (_U. alata_) y madera de pino _taeda_ (_P. taeda_), que no estaban infestados de termitas, para fabricar medios de cultivo estándar. *R. flavipes* y *R. virginicus*. Los troncos de madera de olmo podrida se recogieron en un bosque del Lick Creek Park (College Station, Texas, EE.UU.) en agosto de 2022. Los troncos de madera de pino podrida se recogieron en un bosque del Sam Houston State University Center for Biological Field Studies (Hunts- ville, Texas, EE.UU.) en septiembre de 2022. En cada especie de árbol, los troncos se cortaron con una sierra y se partieron en trozos con un hacha. Se eliminaron las partes muy duras de los troncos (por ejemplo, el duramen) y las partes restantes se utilizaron para fabricar los medios, de acuerdo con un estudio anterior (***Mitaka et al. 2023***[^11]). En primer lugar, los fragmentos de madera se remojaron en agua durante un día y, a continuación, se picaron en una batidora de alto rendimiento (Vitamix Professional Series 200, Vitamix Corporation, Cleveland, Ohio, EE.UU.). Después de filtrar el agua a través de una red de malla fina para lavandería, se esterilizaron en autoclave unos 3 L de madera en polvo residual a 121 °C durante 15 minutos y, a continuación, se secaron durante 5 minutos (esterilizador STERIS Amsco LG-250 Laboratory System Sterilizer, Ohio, EE.UU.). La madera en polvo esterilizada en autoclave se empapó en unos 6 L de agua con unos 0,2 g de levadura seca en polvo (Saf- instant GOLD, Lesaffre Yeast Corporation, Francia) en un recipiente de acero inoxidable. Un recipiente de plástico (295 × 330 × 160 mm). El recipiente se cubrió con una tapa y se mantuvo a unos 25 °C para la fermentación. Dos veces por semana, se eliminaba la materia en suspensión con sobrenadante, se añadía una cantidad de agua fresca igual a la cantidad de sobrenadante eliminada y se agitaba el contenido del recipiente. Este proceso de fermentación se continuó durante al menos un mes para eliminar por completo la materia en suspensión. A continuación, se filtró el agua a través de una red de malla fina y el polvo restante se secó a temperatura ambiente. Por último, el medio BEC (o medio BPC) se completó mezclando el polvo de olmo (o pino) fermentado con polvo de _α-celulosa_ pura (celulosa microcristalina, Thermo Fisher Scientific, Massachusetts, EE.UU.) en una proporción de 1:1 en volumen. ### Recogida de termitas Cinco colonias madre (colonias A a E) de R. flavipes se recolectaron en bosques de Bryan y College Station, Texas, EE.UU., y dos colonias madre (colonias F y G) de_R. virginicus_ se recolectaron en bosques de Huntsville y College Station, Texas, EE.UU. (Tabla 1). Las colonias A, B y C se utilizaron para recolectar alados, y las demás colonias para recolectar obreras. La identificación de las termitas se basó en caracteres morfológicos (***Scheffrahn y Su 1994***[^12]). ### Fundación de colonias Para determinar qué medios alimenticios eran adecuados para el establecimiento de colonias por de alados de R. flavipes, comparamos la supervivencia de parejas de alados hembra-macho y las tasas de emergencia de su primera cría utilizando tres fuentes de alimento diferentes: BEC, BPC y α-celulosa pura (Fig. 1A). Se colectaron alados de tres colonias (A, B y C). Dado que los alados ya habían emergido en la madera del nido cuando se recogieron en el campo, llevamos la madera del nido a nuestro laboratorio, la colocamos en un cubo, la mantuvimos a unos 25 °C y esperamos a que los alados aparecieran en la superficie de la madera del nido antes de recogerlos. Después de recoger los alados, éstos se quitaron las alas de forma natural, o con la ayuda de unas pinzas, levantando las alas directamente sobre el tórax y la cabeza de los alados. Los de alados se separaron por sexos, determinados a partir de las características abdominales externas. Se eligieron al azar parejas individuales de hembras y machos de alados de cada colonia y se colocaron en un plato de plástico de 40 mm forrado con uno de los tres medios alimenticios humedecido con agua destilada hasta una altura de unos 5 mm (equivalente a unos 6280 mm3 ); se seleccionaron 50 (colonias A y C) o 20 (colonia B) parejas de compañeros de nido de cada colonia para cada medio alimenticio. Al cabo de 1, 2, 4, 8 y 16 semanas, se registró la proporción de colonias establecidas en las que sobrevivieron tanto hembras como machos y la proporción de colonias que produjeron huevos, larvas (de primer y segundo estadio) y/o obreras (de tercer estadio o mayores). Las comparaciones de estos Medios de cría de termitas _Reticulitermes fabricados con madera de olmo y pino podrida. ![[Pasted image 20240918201529.png]] Las proporciones (variable binaria: presente o ausente) entre los medios alimenticios en cada semana se realizaron utilizando un modelo lineal mixto generizado (MLGM) con una distribución binomial. En estos modelos, cada proporción era una variable de respuesta, el alimento era una variable explicativa y la colonia se consideraba un efecto aleatorio. Se realizaron pruebas de razón de verosimilitud (LRT) para comprobar la significación de la variable explicativa, y pruebas HSD de Tukey para comprobar las diferencias entre niveles de un efecto fijo significativo. Todos los análisis estadísticos se realizaron en el software R ver. 4.0.0 (**R Core Team 2016**[^13]). ### Supervivencia de los trabajadores, crecimiento y digestión de los alimentos Para comparar los efectos a largo plazo sobre la tasa de supervivencia, el aumento de peso corporal, la tasa de consumo de alimento y el coeficiente de digestibilidad aparente (CDA) de las obreras de _R. flavipes_ y _R. virginicus_ entre los medios BEC, BPC y celulosa pura, realizamos una prueba de alimentación durante 8 semanas. Colocamos 50 obreras en un plato pequeño (de 40 mm de diámetro) lleno de uno de los tres medios mencionados hasta una altura de 5 mm (equivalente a unos 6280 mm3 ). Para calcular el contenido de agua de los medios BEC y BPC, medimos el peso húmedo de cada medio en un plato pequeño, los secamos a 125℉ (equivalente a unos 51,67 °C) durante 24 h y, a continuación, medimos el peso seco. El plato se cubrió con una tapa y se mantuvo a unos 25 °C bajo un fotoperiodo de 14L:8D. Cada tratamiento tenía diez réplicas (5 réplicas/colonia × 2 colonias/especie) utilizando dos colonias de _R. flavipes_ (D y E) y dos colonias de _R. virginicus_ (F y G). Se registró el número de individuos supervivientes y su peso total cada 4 semanas para calcular el peso corporal por individuo. La tasa de supervivencia se comparó mediante un GLMM. En este modelo, la tasa de supervivencia se trató como una variable de respuesta asumiendo una distribución binomial. Los tipos de alimento, las semanas medidas desde el inicio del experimento y las interacciones entre tipos de alimento y semanas se trataron como variables explicativas. Las colonias se trataron como efectos aleatorios. El peso corporal de los supervivientes se comparó mediante un modelo lineal mixto (MLM). En este modelo, el peso corporal se trató como variable de respuesta. Tipos de alimentos, semanas a partir del inicio del experimento e interacciones entre tipos de alimentos y las semanas se trataron como variables explicativas. Las colonias se trataron como efectos aleatorios. Para las comparaciones post hoc de la interacción entre los tipos de alimento y las semanas en cada una de las tasas de supervivencia y los pesos corporales de los supervivientes, se realizaron comparaciones múltiples por pares mediante la prueba de Chi-cuadrado y se aplicó una corrección secuencial de Bonferroni para evaluar la significación por pares. Tras registrar la tasa de supervivencia y el peso corporal de las obreras supervivientes 8 semanas después del inicio del experimento, separamos el medio no consumido (grumo pulverulento húmedo) y la materia fecal (material pastoso húmedo) en el plato pequeño, los secamos a 125 ℉ (equivalente a unos 51,67 °C) durante 24 h y, a continuación, medimos su peso en seco. Posteriormente, comparamos la tasa de consumo de alimentos, y el coeficiente de digestibilidad aparente (ADC) (**Robbins 1983**[^14]) entre los tres alimentos diferentes. Alimentos La tasa de consumo se calculó como 100 × (Wstart -Wfinish)/ Wstart , donde Wstart y Wfinish son los pesos secos del alimento al inicio y al final del experimento, respectivamente. La ADC se calculó como 100 × (Wstart - Wfinish-Wfeces )/(Wstart -Wfinish), donde Wfeces es el peso seco de las heces al final del experimento. Tasa de consumo de alimento y ADC se compararon utilizando un LMM. En estos modelos, la tasa de consumo de alimento o ADC era una variable de respuesta, el alimento era una variable explicativa y la colonia se consideraba un efecto aleatorio. Se realizaron pruebas LRT para comprobar la significación de cada variable explicativa y pruebas HSD de Tukey para comprobar las diferencias entre los niveles de un efecto fijo significativo. Todos los análisis estadísticos se realizaron en el software R ver. 4.0.0 (**R Core Team 2016**[^13]). ### Resultados #### Supervivencia y crecimiento de colonias incipientes en _R. flavipes_ Para confirmar si los medios BEC y BPC son más adecuados para el establecimiento de colonias de _R. flavipes_ de alados que el medio de celulosa pura, criamos las colonias establecidas durante 16 semanas para determinar la supervivencia de los de alados que se convirtieron en el rey y la reina primarios, y el momento de la aparición de huevos, larvas y obreras. ![[Pasted image 20240918201909.png]] _Fig. 1 Esquema experimental de la prueba de fundación de colonias A y dinámica de las proporciones de las colonias fundadas con de alados supervivientes B, huevos C, larvas D y obreras E. Los valores denotan la media ± error estándar de la media (EEM) de 120 réplicas (colonias A y C: 50 réplicas, colonia B: 20 réplicas). Letras distintas indican diferencias significativas (GLMM seguido de la prueba HSD de Tukey, P < 0,05). NA indica "no aplicable" porque no había larvas. o recuentos de obreras esa semana. Después de 16 semanas, en los medios BEC y BPC, todos los huevos eclosionaron en más del 90% de las colonias fundadas, algunas de las larvas eclosionadas se convirtieron en obreras y las de alados dejaron de poner huevos durante un tiempo. Sin embargo, en el medio de celulosa, el 64% de las colonias fundadas aún tenían huevos y sólo el 17% de las colonias habían eclosionado larvas. La proporción de las colonias establecidas en las que sobrevivieron tanto alados hembras como machos no difirió entre todos los tipos de medios para cada semana (cada semana: LRT, _df_ = 2, 2χ ≤ 0,910, _P_ > 0,05, Fig. 1B y fueron superiores al 86% durante las 16 semanas en todos los medios (BEC: 88%, BPC: 88%, celulosa: 86%). La proporción de colonias establecidas que produjeron huevos fue la más alta en el medio BEC y la más baja en el medio BEC. en el medio de celulosa una semana después de la cría (LRT, _df_ = 2, _χ_2 = 10,641, _P_ < 0,01, prueba HSD de Tukey, _P_ < 0,05, Fig. 1C, pero a las 2 semanas post-crianza, por el contrario, la pro- porción fue la más alta en el medio de celulosa (LRT, _df_ = 2, _χ_2 = 22,815, _P_ < 0,001, prueba HSD de Tukey, _P_ < 0,001, Fig. 1C. A las 4 y 8 semanas después de la cría, no hubo diferencias en la proporción entre los medios (4 semanas después: LRT, _df_ = 2, _χ_2 = 2,811, _P_ > 0,05; 8 semanas después: LRT, _df_ = 2, _χ_2 = 0,304, _P_ > 0,05), y se encontraron huevos en más del 65% de las colonias establecidas en todos los tipos de medios (Fig. 1C. A las 16 semanas después de la cría, la proporción disminuyó significativamente en los medios BEC (10%) y BPC (8%), pero siguió siendo alta en el medio de celulosa (64%) (LRT, _df_ = 2, _χ_2 = 123,100, _P_ < 0,001, prueba HSD de Tukey, _P_ < 0,001, Fig. 1C. La proporción de las colonias establecidas que produjeron larvas se comparó entre los medios sólo a las 8 y 16 semanas después de la cría, porque las larvas no emergieron hasta 8 semanas después de la cría. A las 8 semanas después de la cría, las larvas eclosionaron en más del 65% de las colonias establecidas en los medios BEC y BPC, pero sólo en el 7% de las colonias establecidas en el medio de celulosa (LRT, _df_ = 2, _χ_2 = 145,230, _P_ < 0,001, prueba HSD de Tukey, _P_ < 0,001, Fig. 1D. Esta tendencia continuó hasta 16 semanas después del inicio de la cría, cuando las pro- porciones finales fueron del 78% en medio BEC, del 80% en medio BPC y del 17% en medio celulósico (LRT, _df_ = 2, _χ_2 = 135,780, _P_ < 0,001, prueba HSD de Tukey, _P_ < 0,001, Fig. 1D. La proporción de colonias establecidas que produjeron obreras se comparó entre los medios sólo a las 16 semanas de la cría, ya que las larvas no mudaron obreras hasta 16 semanas después del inicio de la cría. Como resultado, aparecieron obreras en más del 79% de las colonias establecidas en los medios BEC y BPC, pero sólo en el 21% de las colonias en el medio de celulosa (LRT, _df_ = 2, _χ_2 = 118,840, _P_ < 0,001, prueba HSD de Tukey, _P_ < 0,001, Fig. 1E. Además, después de 8 semanas de fundación de colonias, sólo en el medio de celulosa, docenas de platos tenían manchas marrones, negras o rojas desarrolladas en la superficie del medio de celulosa, mientras que no se observó tal crecimiento en el medio BEC o BPC. #### Supervivencia de las obreras, crecimiento y digestión del alimento en _R. flavipes_ Realizamos un experimento de alimentación a largo plazo (8 semanas) con obreras de _R. flavipes_ para confirmar si los medios BEC y BPC pueden utilizarse como alimento para las obreras. No hubo diferencias significativas en la tasa de supervivencia y el peso corporal por individuo entre todos los tipos de medios a lo largo de las 8 semanas (tasa de supervivencia: LRT, interacción entre tipos de alimento y semanas, BEC vs BPC, _df_ = 1, χ2 = 0,035, _P_ > 0,05, BPC vs celulosa, _df_ = 1, _χ_2 = 0,235, _P_ > 0,05, BEC vs celulosa, _df_ = 1, _χ_2 = 0,088, _P_ > 0,05, Fig. 2A; peso corporal por obrera: vs BPC, _df_ = 1, χ 2 = 0,596, _P_ > 0,05, BPC vs celulosa, _df_ _R.  flavipes_  reveló  que  la  proporción  de  colonias establecidas con larvas y obreras era mucho mayor en los medios BEC y BPC que en el medio de celulosa después de 16 semanas tras la fundación. Asimismo, a las 16 semanas de la fundación de la colonia, la proporción de colonias fundadas con huevos = 1, _χ_2 = 0,318, _P_ > 0,05, BEC vs celulosa, _df_ = 1, _χ_2 = 0.020, _P_ > 0,05, Fig. 2B, pero la tasa de consumo de alimento después de 8 semanas fue menor en el medio de celulosa que en los otros medios (LRT, _df_ = 2, _χ_2 = 29,517, _P_ < 0,001, prueba HSD de Tukey, _P_ < 0,001, Fig. 2C. Además, no hubo diferencias en el ADC después de 8 semanas entre todos los tipos de medios (LRT, _df_ = 2, _χ_2 = 3,165, _P_ > 0,05, Fig. 2D), lo que indica que las termitas fueron igualmente eficientes en la digestión de los diferentes medios. #### Supervivencia de las obreras, crecimiento y digestión del alimento en _R. virginicus_ Para comprobar si los medios BEC y BPC pueden utilizarse para especies distintas de _R. flavipes, realizamos un experimento de alimentación a largo plazo con obreras de _R. virginicurs. Las tasas de supervivencia no mostraron diferencias significativas entre todos los tipos de medios a lo largo de las 8 semanas (LRT, interacción entre tipos de alimento y semanas, BEC frente a BPC, _df_ = 1, _χ_2 = 1,037, _P_ > 0,05, BPC frente a celulosa, _df_ = 1, _χ_2 = 0.012, _P_ > 0,05, BEC vs celu- perder, _df_ = 1, _χ_2 = 1,266, _P_ > 0,05, Fig. 3A, aunque el medio BEC tendía a tener tasas más bajas que los otros medios a las 8 semanas de la cría (BEC: 76%, BPC: 87%, celulosa: 89%). No hubo diferencias significativas en el peso corporal por obrera ni en la tasa de consumo de alimento entre todos los tipos de medios (peso corporal por obrera: LRT, interacción entre tipos de alimentos y semanas, BEC vs BPC, _df_ = 1, _χ_2 = 0,538, _P_ > 0,05, BPC vs celulosa, _df_ = 1, _χ_2 = 0,017, _P_ > 0,05, BEC vs celulosa, _df_ = 1, _χ_2 = 0,666, _P_ > 0,05, Fig. 3B; tasa de con- sumo de alimentos: LRT, _df_ = 2, _χ_2 = 3,676, _P_ > 0,05, Fig. 3C. Sin embargo, a diferencia de las obreras de _R. flavipes, el ADC fue mayor en el medio BPC que en los otros medios (LRT, _df_ = 2, _χ_2 = 24,006, _P_< 0,001, prueba HSD de Tukey, _P_ < 0,001, Fig. 3D). ### Debate Las termitas Reticulitermes anidan principalmente en troncos de pinos en descomposición, pero también pueden anidar en troncos de frondosas (**Smythe y Carter 1970[^15]; Smythe et al. 1971**[^16]). De hecho, en los bosques donde recolectamos termitas en este estudio, las termitas _Reticulitermes anidan a menudo en madera en descomposición de pino _taeda (P. taeda) o en maderas duras en descomposición, incluido el olmo alado (U. alata). Por lo tanto, intentamos preparar medios no sólo a partir de madera de pino sino también de madera de olmo y determinar si estos medios son adecuados para la cría de dos especies de termitas, R. flavipes y _R. virginicus. Se realizaron pruebas de fundación de colonias utilizando establecidas con larvas y obreras era mucho mayor en los medios BEC y BPC que en el medio de celulosa después de 16 semanas tras la fundación. Asimismo, a las 16 semanas de la fundación de la colonia, la proporción de colonias fundadas con huevos fue baja en los medios BEC y BPC porque la mayoría de los huevos eclosionaron en larvas, mientras que se mantuvo alta en el medio c e l u l ó s i c o , donde muchos huevos no pasaron a la fase larvaria (BEC: 10%, BPC: 8%, celulosa: 64%, Fig. 1C. Estos resultados indican que la anidación y la puesta de huevos se producen en todos los medios a las ocho semanas de la fundación de la colonia, pero el desarrollo larvario se retrasa o se ve afectado en el medio sólo celulósico. Se sabe que las levaduras pueden producir diversos ácidos orgánicos, incluido el ácido acético, en el proceso de fermentación de la madera (**Sirén et al. 2015**[^17]), y que el ácido acético actúa como nutriente (**Brune 2014**[^18]) y como agente antimicrobiano (**Inagaki 2018**[^19]) para las termitas. Por lo tanto, los ácidos orgánicos, incluido el ácido acético, podrían ser un buen nutriente para las parejas de R. flavipes de alados y esterilizar el interior de los medios BEC y BPC. Debido a que Reticulitermes de alados aumenta ligeramente su propio peso corporal y la cantidad de la madera distintos de la celulosa durante este periodo, es posible que no sean capaces de proporcionar a los huevos una nutrición suficiente para su desarrollo. Si los alados no pueden ingerir otros componentes derivados de la madera distintos de la celulosa durante este periodo, es posible que no puedan proporcionar a los huevos la nutrición suficiente para su desarrollo. Además, la madera de pino contiene varios tipos de terpenos antimicrobianos (**Gershenzon y Dudareva 2007**[^20]), por lo que se supone que el medio BPC fabricado con madera de pino es menos propenso al crecimiento de patógenos. Además, el medio de celulosa no contiene ninguna sustancia antimicrobiana y, de hecho, sólo se observaron manchas en la superficie de este medio en docenas de platos, mientras que no se observaron manchas de este tipo en ninguno de los medios que contenían madera. Por lo tanto, es es posible que los alados dedicaran más recursos nutricionales a la producción de sustancias antimicrobianas para mantener la higiene de los nidos en el medio celulósico que en los medios BEC y BPC, y que por ello los alados no dedicaran suficiente nutrición y/o cuidado a sus huevos. En general, puede decirse que los nutrientes y compuestos antimicrobianos derivados de la madera podrida marrón son esenciales para el desarrollo saludable de colonias incipientes de R. flavipes, y tanto el medio BEC como el BPC son adecuados para la cría de colonias incipientes. Durante la cría a largo plazo de obreras de _R. flavipes_, no hubo diferencias en la tasa de supervivencia, el peso corporal por obrera y el CDA entre los medios BEC, BPC y celulosa (Fig. 2A B y D), pero la tasa de consumo de alimento fue mayor en los medios BEC y BPC que en el medio de celulosa (Fig. 2C. La razón por la que no hubo diferencias significativas en el ADC entre los medios es que las obreras de los medios BEC y BPC consumieron más alimento que las del medio de celulosa (Fig. 2C). ![[Pasted image 20240918202430.png]] ***Fig. 2** Comparaciones de la tasa de supervivencia **A**, peso corporal por individuo **B**, tasa de consumo de alimento **C** y ADC **D** entre los medios BEC, BPC y celulosa en obreras de R. flavipes. Los valores indican la media ± error estándar de la media (SEM) de diez réplicas (5 réplicas/colonia × 2 colonias). Letras diferentes indican diferencias significativas. **A, B** GLMM, comparaciones por pares de la interacción entre tipos de alimentos y semanas mediante la prueba de rangos logarítmicos, seguida de la corrección de Bonferroni, P < 0,05; **C, D** LMM seguida de la prueba HSD de Tukey, P < 0,05. La tasa de consumo de alimento fue menor en el medio de celulosa que en los medios BEC y BPC, aunque no hubo diferencias significativas en la tasa de supervivencia, el peso corporal por individuo y el CDA entre los medios.* interior de los medios BEC y BPC. Debido a que _Reticulitermes de alados aumenta ligeramente su propio peso corporal y la cantidad de R. _flavipes_ y _R. virginicus cuando se las alimentó con los medios BEC y celulosa (Figs. 2D y 3D) sugieren que las diferentes especies de termitas tienen diferentes eficiencias digestivas para cada medio y diferentes cantidades de materia fecal requerida para recubrir las paredes internas de los nidos. La necesidad de esterilización en el nido puede depender del espectro antimicrobiano y de las cantidades producibles de sustancias antimicrobianas que posea cada especie de termita y del tipo de microorganismos que puedan introducirse en el material del nido. La selección del tipo de medio que sea compatible con cada especie de termita será probablemente crucial para la cría de termitas a largo plazo. Ahora bien, puede decirse que Las obreras de _R. flavipes_ pueden criarse en medios BEC, BPC o de celulosa, pero cuando se crían obreras de _R. virginicus_, el medio BPC es más adecuado que los medios BEC y de celulosa porque digieren el alimento con mayor eficacia. Hemos demostrado que los medios BEC y BPC son útiles para el establecimiento de colonias incipientes de R. flavipes, pero para aumentar aún más el tamaño de las colonias incipientes, puede ser necesario un suelo con altos niveles de nitrógeno, además de estos medios a base de madera. Esto se debe a que un estudio anterior demostró que el suelo orgánico es necesario para acelerar el crecimiento de las colonias fundadoras de la termita Coptotermes formoranus, que está estrechamente relacionada con las termitas Reticulitermes (**Mullins et al. 2021**[^21]). La madera en descomposición habitada por termitas se considera generalmente pobre en nitrógeno **(Scharf y Peterson 2021**[^22]). Aunque un estudio previo informó de que la fermentación con levadura aumenta el contenido de proteína bruta del polvo de madera podrida marrón en una pequeña cantidad, el contenido de proteína bruta del medio BPC es sólo del 2% (**Mitaka et al. 2023**[^23]), lo que lo convierte en una fuente bastante pobre de nitrógeno. Por lo tanto, es posible seguir criando termitas sólo en el medio BEC o BPC, pero si queremos aumentar la eficiencia de la ingesta de fuentes de nitrógeno por parte de las termitas y aumentar la tasa de crecimiento de la colonia, puede ser mejor un método de cría que proporcione a las termitas acceso tanto al medio como al suelo orgánico. Sin embargo, existe el riesgo de que la introducción de suelo orgánico permita la entrada de patógenos en el nido de termitas, matando a las termitas debido a la infección de enfermedades. Por lo tanto, puede ser más seguro introducir tierra sólo después de que el número de obreras en la colonia haya aumentado lo suficiente como para permitir que las obreras dediquen esfuerzos a esterilizar el nido. Además de la tierra orgánica, la adición de ácido úrico como fuente de nitrógeno al medio BEC o BPC también puede ser eficaz para promover la producción de huevos por parte de las termitas reinas. Esto se debe a que se ha demostrado que la adición de ácido úrico a la dieta aumenta la producción de huevos cuando se crían colonias incipientes o maduras de termitas (**Shellman- Reeve 1990**[^24]; **Brent y Traniello 2002**[^25]). Además, un estudio reciente reveló que sólo los reyes y las reinas de una colonia de termitas subterráneas expresan urato oxidasa, que cataliza el primer paso del reciclaje de nitrógeno a partir del ácido úrico almacenado, y los metabolitos resultantes pueden ser utilizados para la producción de huevos por las reinas (**Konishi et al. 2023**[^26]). Sin embargo, mientras que la urato oxidasa de las termitas se expresa en gran medida en las Si bien el ácido úrico se expresa en todas las colonias reproductivas, raramente se expresa en las aladas y en los reyes y reinas primarios de colonias incipientes que llevan establecidas unos 6 meses (**Konishi et al. 2023**[^27]). En conjunto, estos estudios sugieren que la adición de ácido úrico a los medios BEC o BPC puede ser mejor para criar colonias con un rey y una reina maduros (o madurando) y muchas obreras que para criar colonias jóvenes con un rey y una reina primarios inmaduros y unas pocas obreras. En este estudio demostramos que el método de preparación del medio BPC para la cría de R. speratus descrito en un estudio anterior (**Mitaka et al. 2023**[^28]) es aplicable de forma más general a otras especies de árboles y a otras especies de termitas. A continuación, demostramos que tanto el medio BEC elaborado a partir de madera de olmo como el medio BPC elaborado a partir de madera de pino pueden utilizarse para criar colonias incipientes y obreras de R. flavipes. Teniendo en cuenta un estudio previo que informaba de que menos del 50% de las parejas de de alados sobrevivían cuando se utilizaba madera natural podrida directamente para el establecimiento de colonias (**Eyer y Vargo 2022**[^29]), cabe destacar que las tasas de supervivencia de las parejas de de alados son mucho mayores cuando las colonias incipientes se establecen en los medios BEC y BPC (> 87%, Fig. 1B). Además, el medio BPC demostró ser más adecuado para criar obreras de _R. virginicus que los otros medios probados. Dado que estas dos especies de termitas pueden anidar en madera en descomposición distinta de la del olmo alado y la del pino taeda (**Smythe y Carter 1970**[^30]), es posible que existan otras especies de árboles que puedan utilizarse como medios para el cultivo de estas especies de Reticulitermes. Sin embargo, como mínimo, es probable que tanto la madera de pino parda podrida como la madera dura estén disponibles para la cría de estas especies de R. flavipes, y puede ser más eficaz utilizar madera de pino que la madera dura para la cría de R. virginicus. Este trabajo contribuirá a la estabilidad y eficacia de los experimentos de cría de termitas. **Informaci****ó****n complementaria** La versión en línea contiene material complementario disponible en https://doi.org/10.1007/s00040-023-00928- 1. **Agradecimientos** Damos las gracias a Kyle Gilder, Sarah Turner y Darshan Chetty por la recogida de termitas y troncos de madera de olmo y pino de pudrición marrón; al Centro de Estudios Biológicos de Campo de la Universidad Estatal de Sam Houston por facilitarnos el acceso a sus instalaciones para la recogida de termitas y troncos. Este trabajo ha contado con el apoyo de becas de investigación en el extranjero de la Sociedad Japonesa para el Fomento de la Ciencia (JSPS) (a YM) y de la Dotación para Entomología Urbana de la Universidad A&M de Texas (a ELV). **Contribuciones de los autores** YM diseñó el estudio. YM y ELV recolectaron las termitas y la madera. YM realizó los experimentos y los análisis. YM escribió el artículo con la colaboración de ELV. **Disponibilidad de los datos** Los datos utilizados en este documento están disponibles en la información complementaria. **Acceso abierto** Este artículo está bajo una licencia de Creative Commons Attri- bution 4.0 International License, que permite utilizarlo, compartirlo, adaptarlo, distribuirlo y reproducirlo en cualquier medio o formato, siempre que se cite debidamente al autor o autores originales y la fuente, se proporcione un enlace a la licencia Creative Commons y se indique si se han realizado cambios. Las imágenes u otro material de terceros en este artículo están incluidos en la licencia Creative Commons del artículo, a menos que se indique lo contrario en una línea de crédito al material. Si el material no está incluido en la licencia Creative Commons del artículo y su uso previsto no está permitido por la normativa legal o excede el uso permitido, deberá obtener permiso directamente del titular de los derechos de autor. Para ver una copia de esta licencia, visite [http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/.](http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/) #### Declaraciones **Conflicto de intereses** Los autores declaran no tener ningún conflicto de intereses. [^1]: Lo N, Eggleton P (2011) Termite phylogenetics and co-cladogenesis with symbionts. In: Bignell DE, Roisin Y, Lo N (eds) Biology of termites: a modern synthesis. Springer, New York, pp 27–50 [^2]: Rust MK, Su N (2012) Managing social insects of urban importance. Annu Rev Entomol 57:355–375. 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